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新闻中心

Pall让老板和你都满足的高通量核酸获取

点击次数:729 更新时间:2015-11-25

Pall让老板和你都满足的高通量核酸获取


在这个争分夺秒、寻求功率的时代,许多实验室的核酸获取已经在向高通量改动。样品在变,办法也要变,否则一个一个地来获取,手抽筋事小,加错溶液,交叉污染可就不得了。市场上早就出现了一系列高通量的核酸获取试剂盒,包含获取操作所需的全部。当然,你很喜欢,因为省时省力,但老板未必喜欢,因为不省钱。那么如安在计算有限的情况下,地获取核酸呢?
质粒DNA获取
我们先从质粒DNA的获取说起。2011年,Pall Life Sciences的三位科学家在Jove视频实验期刊上发表文章,介绍了一种从96个细菌培养物中纯化质拉DNA的简练办法1。在这个进程中,他们运用了Pall用于裂解液澄清以及用于DNA提纯的AcroPrep Advance滤板,再联络真空抽滤的办法,快速得到了高质量的质拉,OD260/280比值抵达1.97.
Pall用于水溶液过滤的 AcroPrep Advance 96 孔板
快速处理
去掉微粒
新井几何致使更快、更均匀的过滤率across板举行,体积减少
新出口提示几何推进直接样本流入crosscontamination的接收器板没有疑问
改动和孔隙大小选择供应了的颗粒去掉
制造符合SBS攻略,容许运转在手动,盘子半自动化和自动化的进程
润滑的外表和纹路窗口容许简略的标签板,以及dojo。通过切断A1角落供应简略运用的方向
Pall用于水溶液过滤的 AcroPrep Advance 96 孔板运用程序:
通常样品制备
总分馏
细胞收成
在单元测试的基础上
Pall用于水溶液过滤的 AcroPrep Advance 96 孔板技术参数:
材料构成
过滤器媒体:苏泊尔(polyethersulfone)、玻璃纤维(硼硅玻璃没有粘结剂),PP / PE非织造(聚丙烯/聚乙烯)媒体
板住所:聚丙烯
盖子:聚苯乙烯
大小
长度:12.8厘米(5.0英寸)。
宽度:8.6厘米(3.4英寸)。
与盖子高度:1.8厘米(0.7英寸)(仅350亩L)
不盖高度:350亩,1.4厘米(0.6英寸);1毫升:3.3厘米(1.3英寸);2 mL:4.7厘米(1.9英寸)。
——底部区域
0.25平方厘米
它作业容积
350亩李:< 300亩L 1毫升:< 900亩L 2 mL:< 1.9毫升
在真空操作
> 25.4厘米汞(10。在汞)
它离心力
1500 x g
这种办法带来了高的DNA产量(8.7 μg/well),且能够以手动、半自动或全自动的办法打开。裂解液澄清滤板对富含大量大微拉的样品进行一同的过滤,而DNA联络滤板的高联络才干也zui大极限收回了高质量的质粒DNA.
工欲善其事,必先利其器。实验的胜败,与所选用的办法有很大的联络。有时,少数样品的获取办法并不能推及到高通量。就重细胞裂解来说吧,离心通常是别离细胞碎片的办法。可是,对于高通量办法,离心这种办法会带来许多疑问。首要,在多孔板中沉积细胞碎片并收回上清是十分困难的。其次,离心时刻长,需求特别的离心机或转子。不过,zui大的疑问在于疏松的沉积会捕获很大一部分的质粒DNA.
而真空过滤这种办法则有效地代替了离心沉降。用于裂解液澄清AcroPrep Advance滤板具有大孔的预过滤器,能对富含大量大微拉的样品进行过滤,以避免堵塞。今后选用更严厉的微孔过滤器进行精细处理,使得流速快,且不堵塞。它选用新式的出口几何计划,让样品能直接流到接收盘,而无需担忧交叉污染。一旦澄清,质粒DNA样品便可直接用于DNA洁合板上的纯化。
至于DNA联络,硅介质和玻璃纤维膜如同已成为标配.离液盐推进了DNA与介质的联络。这为洗刷杂质带来了一种便当的办法,今后可用中性溶液洗脱DNA。富含硅介质的滤板可通过真空过滤或离心而轻松处理,发作所需量的质粒DNA.现在市场上虽然有许多种玻璃纤维过滤板,但它们的表现不尽相同。对于研讨人员而言,DNA产量当然是越高越好,特别是在处理名贵样品时。用于DNA提纯的AcroPrep Advance滤板,便是为了DNA联络而优化的。它具有强吸附才干,能从各种样品中zui大化地联络DNA。纯化所得的质拉DNA的OD260/280比值抵达1.97,适宜测序和克隆等苛刻的下贱运用。

吸附才干,能从各种样品中zui大化地联络DNA。纯化所得的质拉DNA的OD260/280比值抵达1.97,适宜测序和克隆等苛刻的下贱运用。
至所以选择离心仍是真空过滤,这要看你对DNA产量的恳求,以及处理时刻和可用本钱。相对而言,真空过滤简略自动化,简练易行。不过根据Pall的研讨,DNA浓度和洗脱体积相对于离心有少少的丢失,但也不阻碍,因为AcroPrep Advance滤板的洗脱体积仍是高于同类滤板,产量天然也是更胜*。
基因组DNA获取
同样地,AcroPrep Advance滤板的办法也能用于基因组DNA的获取。在科研和临床研讨的许多实验中,我们都需求从新鲜或冻存的血液中获取DNA。运用市售的试剂盒当然是一种办法,但你或许想要一种更加经济、更加活络的选择。Pall的科学家以为,选用AcroPrep Advance滤板进行基因组DNA纯化,不失为一种好办法。
他们曾凭仗epMotion 5075液体处理系统以及QIAGEN的gDNA buffer,运用AcroPrep Advance DNA联络滤板从新鲜的全血中获取出gDNA。效果标明,6块Pall滤板的DNA收回率在71-86%之间,与比赛产品相似。DNA纯度也恰当高,OD260/280比值在1.73-1.83的计划。凝胶电泳图也说明DNA质量很高。
这些效果闪现,AcroPrep Advance DNA联络滤板与市售的缓冲液联络运用,能带来的gDNA纯化。与收购完好的试剂盒对比,获取本钱能降低50%。在省钱的一同,又不献身DNA的产量、纯度或质量,何乐而不为呢?
更多运用
AcroPrep Advance滤板选用新计划,将膜独自切开、放置和封装在孔内,而封装技术既能封装单层膜,也能封装多层膜,满足不一样的需求。滤板底部特别计划的导流器和出口端减少了交叉污染的也许,也避免漏液。一同,新式的几何计划也使得流速更快,更加均一,然后改进了各孔之间、各板之间和各批次之间的一同性。当然,AcroPrep Advance滤板也是自动化兼容的,容许全部操作进程在自动化设备上进行。
 

 
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